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技術文章

Technical articles

當前位置:首頁技術文章zeptometrix 0801010說明書

zeptometrix 0801010說明書

更新時間:2018-07-24點擊次數:2267

 

zeptometrix成立于1999年,是一家為藥物研究行業提供診斷產品和服務的的私人控股公司。zeptometrix公司(ZMC)是一個傳染病診斷行業先進者和創新者,為的客戶提供值得信賴的產品和服務。zeptometrix是一個*集成的生物技術公司的產品支持的研發的所有階段;發展,驗證,制造和商業化的診斷測試。zeptometrix不斷開拓創新,致力為生命科學行業帶來更多產品與服務。

 

Chicken IgY ELISA

 Catalog #: 0801010

雞IgY ELISA

 

Catalog #: 0801010

 

預期用途

 

雞IgY是在鳥類中發現的類IgG分子的名稱.IMMOTEK雞IgY(IgG)ELISA*是一種快速、易于使用的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。 測定雞血清、蛋黃或蛋黃、血漿、唾液、粘膜、細胞培養液或其他生物樣品中的雞IgY。

 

*研究目的。不用于體外診斷。

 

試驗原理

 

微板井包被抗雞IgY的多克隆抗體,形成捕捉期。雞IgY標本樣品及提供的標準被適當稀釋。 用阿泰稀釋劑,然后在微板井中孵化。水洗后,將捕獲的雞IgY與檢測抗體孵育,這是一種多克隆抗雞IgY與h結合的抗體。 辣根過氧化物酶(HRP)這種抗體只反應于免疫球蛋白分子的FC部分,允許特異性地檢測IgY免疫球蛋白。再洗一步,染色 添加了ENIC底物四甲基聯苯胺(TMB),并與抗體包被板結合的雞IgY的數量成比例地形成藍色。酶反應停止 d通過加入停止溶液,使顏色變為黃色,在450 nm處可分光度法測量。然后根據標準計算雞IgY的濃度。 d曲線

 

反應物,試劑( reagent的名詞復數 )

 

提供的材料

 

·微板,(1×96井):12×8井條,涂有羊抗雞IgY

 

·雞IgY檢測抗體(12 Ml):含hrp結合山羊抗雞IgY(fc片段特異性)

 

·雞IgY標準(7ml):檢測稀釋劑中含有125 ng/ml雞IgY

 

·分析稀釋劑(100毫升):含有PBS,阻斷蛋白,TritonX-100和2-氯乙酰胺作為防腐劑。

 

·10X平板洗滌緩沖液(125毫升):含PBS、吐溫20和2-氯乙酰胺作防腐劑

 

·底物(12毫升):含四甲基聯苯胺(TMB)

 

·停液(12毫升):配方

 

·微板封口機(1 PK):每包10封

 

·可密封塑料袋(1袋):用于儲存未使用的微板條

 

所需但未提供的材料:

 

·個人防護設備(一次性手套、實驗室外套、安全眼鏡等)

 

·蒸餾或去離子水

 

汽缸和燒杯

 

制備試樣和IgY標準稀釋劑用·試驗管和機架

 

·驗證了單通道和/或多通道可調微吸管和針尖

 

· Timer

 

·在18-25?C·吸水性紙巾上驗證了溫控室或溫控室

 

有效測量450nm光密度的微板閱讀器

 

·自動微板機或手動吸真空設備·圖文或計算機繪圖軟件

 

貯存

 

將所有試劑盒試劑保存在2-8℃,不要凍結.未使用的微板帶應保存在一個密封袋與干燥劑,以盡量減少暴露在濕氣。所有試劑的存儲和處理都是正確的。 至少可以在包盒標簽上打印的過期日期之前。

 

預防措施( precaution的名詞復數 )

 

·在進行檢測之前,仔細閱讀所有的說明。

 

·在處理工具包組件和測試樣本時使用通用的預防措施。*

 

·為了避免交叉污染,對每個樣品使用單獨的吸管尖.

 

·在檢測可能具有傳染性的標本時,應遵守所有適用的地方、州和聯邦有關生物危險材料處置的規定。

 · 停止溶液含有鹽酸,可能造成嚴重燒傷。如果接觸眼睛或皮膚,請立即用水沖洗,并尋求醫療救助。穿著防護服和眼睛 *MMWR,1988年6月24日,卷。37,第24號,第377至382頁,387-388頁。

 

試劑的制備

 

平板洗滌緩沖器:

 

在使用前,用蒸餾水或去離子水稀釋10X平板洗滌緩沖液1:10。*混合。準備好的1x平板洗滌緩沖液可在2-8°C保存一周。額外的10X平板沖洗機 如果需要,可以訂購r(zmc目錄#:0801060)。

 

雞IgY標準曲線:

 

雞IgY標準為125納克/毫升,應在試驗稀釋劑中稀釋,以制備下表所示的標準曲線。

 

標本稀釋:

 

雞血清或血漿中估計有7mg/ml的IgY。雞蛋黃含有6~13毫克/毫升的IgY。正因如此,我們建議在化驗稀釋劑中制備1:25萬-300,000倍的稀釋液。 進行初步測試。為了減少稀釋誤差,建議采取三個稀釋步驟。例如,三種1:65倍的系列稀釋劑,其中10ml被添加到640個ml的阿賽稀釋劑,是一個方便的稀釋劑。 計劃。其他樣品可能或多或少含有IgY,需要適當稀釋。稀釋10倍通常足以避免可能的矩陣干擾。

 

檢查法,檢驗法,試驗過程

 

使用前允許所有試劑達到室溫。如上文所述,準備試劑。用于制備標準和樣品的標號試管。如果整個微型平臺 E將不用于測試,從板框中取出多余的帶,然后放入帶有干燥劑的可密封塑料袋中。密封袋并存放在2-8°C。

 

步驟1:將每條標簽貼在其末端標簽上,以確保在檢測過程中這些條帶與板框分離時的標識。

 

步驟2:將標準1-6的200ml移入重復井.

 

第三步:將每個樣本的200m1移入兩口井。

 

第四步:用蓋板蓋上蓋板,在室溫(18-25?C)下孵育30分鐘。

 

第五步:吸入每口井的內容物,用1x板沖洗緩沖液沖洗4次(見試劑準備部分)。若要清洗,請用至少300ml的1x平板洗滌緩沖器和AS填充井。 海盜。執行4個填充/吸氣周期。在后的清洗周期后,仔細地敲擊一塊吸水性紙巾,*擦拭盤子。繼續撞擊,直到沒有可見的磷滴 觀察到了晚洗緩沖液。

 

步驟6:將雞IgY抗體100m1移入每口井。

 

步驟7:用蓋板蓋上蓋板,在室溫(18-25?C)下孵育30分鐘。

 

步驟8:如步驟5所述,用1x板沖洗緩沖器沖洗4次。

 

步驟9:將100m1的基材移入每口井。

 

步驟10:在室溫下(18-25?C)不加蓋板,將盤子孵育30分鐘。含有雞IgY的水井將形成藍色。

 

步驟11:將100m1的止住溶液注入每口井。將發生從藍色到黃色的顏色變化。輕輕敲擊微板混合。

 

步驟12:在15分鐘內,使用微板讀數讀取每孔450 nm的光密度。

 

下面的預期結果是標準曲線的一個例子,不應用于計算實際樣本。從實驗室到實驗室,都可以觀察到由于穿梭機、孵化器回火而引起的變化。 人物、版面讀者等。

 

 

[體]成績統計

 

測試有效性:

 

·0 ng/ml標準的平均光密度必須在0.200以下。

 

·125 ng/ml的平均光密度必須在1.000以上。

 

·建議,當平均光密度值不低于標準曲線時,應以或多或少的稀釋度重新測定樣品。

 

計算,盤算:

 

計算每組標準和稀釋樣品的平均光密度(OD)值。

 

使用線性圖紙或繪圖軟件,繪制Y軸上每個標準的平均OD值與X軸上相應的標準濃度之間的關系。

 

通過這些點畫出zui擬合曲線,構造出一條標準曲線。點對點的構造將是的。

 

用標準曲線插值法測定稀釋樣品的IgY濃度。

 

用稀釋系數乘以稀釋系數,確定原始樣品的IgY濃度。

 

[計] 工作特性

 

特異性,特征,種別性:

 

本試劑盒中的雞IgY抗體經免疫電泳和/或ELISA證明只與雞IgY重鏈的fc部分發生反應,而與雞IgY重鏈的fab部分無反應。 肯免疫球蛋白。未發現對其他非免疫球蛋白血清蛋白的反應。羊、兔、大鼠、驢、山羊、馬、牛、小鼠和人血清對此酶聯免疫吸附試驗無反應。 established 建立

Precision:

 

程序流程圖

 

制備試劑稀釋劑

 

ê吸管標本及標準

 

ê在室溫下孵育30分鐘

 

ê洗盤

 

ê移液管檢測器抗體

 

ê在室溫下孵育30分鐘

 

ê洗盤

 

ê移液管基片

 

室溫孵育30分鐘

 

ê添加停止解決方案并在450 nm處讀取

 

 

 

 

 

 

 

貨號

品名

目錄價

規格

品牌

0801539DNA-1UG

Cryptococcus Neoformans serotype D, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801538DNA-1UG

Candida Tropicalis Z012, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801544DNA-10UG

Proteus Mirabilis Z050, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801545DNA-10UG

Streptococcus Agalactiae 2603V - R, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801562DNA-10UG

Bacillus Subtilis Z094, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801563DNA-10UG

Citrobacter FreundII Z064, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801569DNA-10UG

Stenotrophomonas Maltophilia Z074, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801536DNA-1UG

Candida Krusei Z009, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801537DNA-1UG

Candida Parapsilosis Z011, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801535DNA-1UG

Candida Glabrata Z007, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801519DNA-10UG

Pseudomonas Aeruginosa clinical isolate, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801534DNA-10UG

Listeria Monocytogenes serotype 1 - 2b, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801518DNA-10UG

Enterobacter Aerogenes Z052, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801511DNA-10UG

Neisseria Meningitidis serogroup A, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801506DNA-10UG

Klebsiella Pneumoniae Z026, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801504DNA-1UG

Candida Albicans Z006, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801597DNA-10UG

Acinetobacter BaumannII 307-0294, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801579DNA-10UG

Mycoplasma Pneumoniae M129, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801679DNA-10UG

Haemophilus Influenzae type b; Eagan, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801676DNA-1UG

Histoplasma capsulatum Recombinant, DNA

7001

1 ug

ZeptoMetrix

0801677DNA-1UG

Coccidioides Immitis Recombinant, DNA

7001

1 ug

ZeptoMetrix

0801675DNA-10UG

Staphylococcus Aureus MSSA; mecA-deficient, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801674DNA-10UG

Yersinia Enterocolitica clinical isolate, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801651DNA-10UG

Staphylococcus Epidermidis MRSE; RP62A, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801650DNA-10UG

Campylobacter Jejuni clinical isolate, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801638DNA-10UG

Staphylococcus Aureus MRSA; COL, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801627DNA-10UG

Shigella Sonnei Z004, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801624DNA-10UG

Escherichia Coli ETEC; ST+, LT+ DNA

2730

10 ug

ZeptoMetrix

0801622DNA-10UG

Escherichia Coli O157:H7; EDL933, DNA

2730

10 ug

ZeptoMetrix

0801603DNA-1UG

Candida Lusitaniae Z010, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801619DNA-1UG

Clostridium Difficile NAP1, DNA

7001

1 ug

ZeptoMetrix

0801601DNA-1UG

Aspergillus Terreus Z016, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801602DNA-1UG

Candida GuilliermondII Z008, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801598DNA-1UG

Aspergillus Flavus Z013, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801680DNA-10UG

Haemophilus Influenzae type b; MinnA, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801482DNA-10UG

Neisseria Gonorrhoeae type strain, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801439DNA-10UG

Streptococcus Pneumoniae Z022; 19F (Danish), DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801223

Goat IgG ELISA

4875

96 det.

ZeptoMetrix

0801010

Chicken IgY ELISA

4875

96 det.

ZeptoMetrix

0801198

Bovine IgG ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801188

ELISA Construction System

5343

5 plates

ZeptoMetrix

0801185L

ZeptoBlock

3842

1 L

ZeptoMetrix

0801185

ZeptoBlock

1697

120 ml

ZeptoMetrix

0801184L

ZeptoBind

3842

1 L

ZeptoMetrix

0801184

ZeptoBind

839

60 ml

ZeptoMetrix

0801179L

ZeptoCoat

3842

1 L

ZeptoMetrix

0801179

ZeptoCoat

839

60 ml

ZeptoMetrix

0802001

rhIL-2 Recominant Human Interleukin-2

5850

100 ug

ZeptoMetrix

0801060

10x Plate Wash Buffer

293

125 ml

ZeptoMetrix

0801114

rhIL-2 Recominant Human Interleukin-2 (20.000 units)

1463

1.1 ml

ZeptoMetrix

0801017

TCGF (Natural T-Cell Growth Factor, IL-2)

4700

50 ml

ZeptoMetrix

0801195

ZeptoGel

5207

500 ml

ZeptoMetrix

0801002

HIV-1 p24 Antigen ELISA 2.0 Kit

9341

96 det.

ZeptoMetrix

0801221

Horse IgG ELISA

4875

96 det.

ZeptoMetrix

0801008

HIV-1 p24 Antigen ELISA 2.0 Kit

38805

480 det.

ZeptoMetrix

0801437DNA-10UG

Salmonella Enterica Typhimurium Z005, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801803P

Cryptococcus Neoformans Serotype A, antigen

1092

1.0 ml

ZeptoMetrix

0801202

Rabbit IgG ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801009

Rat IgG ELISA

4875

96 det.

ZeptoMetrix

0801181

Mouse IgM ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801201

SIV p27 Antigen ELISA Kit

49764

480 det.

ZeptoMetrix

0801200

HIV-1 p24 Antigen ELISA Kit

38805

480 det.

ZeptoMetrix

0801197

Human IgA ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801183

Human IgM ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801182

Human IgG ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801169

SIV p27 Antigen ELISA Kit

11993

96 det.

ZeptoMetrix

0801137

HIV-1 p24 Extended Range Kit

1346

kit

ZeptoMetrix

0801116

HTLV p19 Antigen ELISA Kit

11993

96 det.

ZeptoMetrix

0801111

HIV-1 p24 Antigen ELISA Kit

9341

96 det.

ZeptoMetrix

0801096

HIV-1 p24 ICx - CRx Kit

1853

100 det.

ZeptoMetrix

0801180

Mouse IgG ELISA

6689

96 det.

ZeptoMetrix

0801693DNA-10UG

Enterococcus Faecalis VRE, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801084

Anti-HTLV-I gp46 Clone 67 - 5.5.13.1

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801119

Anti-HTLV-II gp46 Clone 73 - 4.9.8

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801120

Anti-HTLV-II p24 Clone 75 - 4.21.11

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801012

Anti-PON1 Clone KRJ1

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801014

Anti-PON1 Clone KRJ2

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801095

Anti-PON1 Clone KRJ1

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801097

Anti-PON1 Clone KRJ2

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801025

Anti-Zika NS1 Clone 1D12

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801032CFHI

HIV Type 1 Strain: IIIB - CFHI

6045

1.0 ml

ZeptoMetrix

0801033CFHI

Human T-Lymphotropic Virus Type I (HTLV-I) - CFHI

6045

1.0 ml

ZeptoMetrix

0801113

Anti-HTLV-II p19 Clone 78 - 6.18.07

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801093

Anti-HTLV-II p19 Clone 78 - 6.18.07

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801094

Anti-HTLV-I gp46 Clone 65 - 6C2.2.34

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801107

Anti-HTLV-I p19 Clone TP-7

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801108

Anti-HTLV-I p19 Clone 45 - 6.11.1.3

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801110

Anti-HTLV-I p24 Clone 46 - 3.24.4

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801127

Anti-HTLV-I gp46 Clone 67 - 5.5.13.1

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0801118

Anti-HTLV-I gp46 Clone 68 - 4.11.21

30732

1 mg

ZeptoMetrix

0802004

Anti-HTLV-I gp46 Clone 65 - 6C2.2.34

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801086

Anti-HTLV-II gp46 Clone 73 - 4.9.8

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801087

Anti-HTLV-II p24 Clone 75 - 4.21.11

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801032

Human Immunodeficiency Virus Type 1 (HIV-1) Strain: IIIB Lysate

27593

1 mg

ZeptoMetrix

0801033

Human T-Lymphotropic Virus Type I (HTLV-I) Lysate

31181

1 mg

ZeptoMetrix

0801216

Dinucleotide Standards ThymineGlycolCytidineDimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801217

Dinucleotide Standards ThymineGlycolAdenineDimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801218

Nucleoside Standards 8-Oxo-dG

1287

1 mg

ZeptoMetrix

0801219

Nucleoside Standards 8-Oxo-dA

1365

1 mg

ZeptoMetrix

0801384

PON Standards

5265

600 ul

ZeptoMetrix

0801500

Simian Immunodeficiency Virus (SIV) Kit (10 Strip)

9360

10 det.

ZeptoMetrix

0801501

Simian Immunodeficiency Virus (SIV) Kit (30 Strip)

22854

30 det.

ZeptoMetrix

0801502

Simian Immunodeficiency Virus (SIV) Strips (10/tube)

5343

10 strips

ZeptoMetrix

0801021

Zika (PRVABC59) Strips (10/tube)

5343

10 strips

ZeptoMetrix

0801215

Dinucleotide Standards ThymineGlycolThymineDimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801214

Dinucleotide Standards ThymineGlycolGuanineDimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801808

Scedosporium prolificans Z083

8775

1.0 ml

ZeptoMetrix

0801192

TBARS Assay kit

7995

160 det.

ZeptoMetrix

0801199

Arylesterase - Paraoxonase Assay Kit

7995

200 tests

ZeptoMetrix

0805002

Total Glutathione Peroxidase Assay Kit

7625

100 tests

ZeptoMetrix

0805004

Glutathione Reductase Assay Kit

10257

100 tests

ZeptoMetrix

0801210

Dinucleotide Standards Formamido Guanine Dimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801211

Dinucleotide Standards Formamido Cytidine Dimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801212

Dinucleotide Standards Formamido Thymine Dimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801213

Dinucleotide Standards Formamido Adenine Dimer

1287

50 mg at 1.0 OD

ZeptoMetrix

0801022

Zika (MR-766) Strips (10/tube)

5343

10 strips

ZeptoMetrix

0801085

Anti-HTLV-I gp46 Clone 68 - 4.11.21

4388

100 ug

ZeptoMetrix

0801698DNA-1UG

Pneumocystis Jiroveci Recombinant W303-Pji, Genomic DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801765DNA-1UG

Scedosporium Apiospermum Z085, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801770DNA-1UG

Fusarium Oxysporum Z084, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801802DNA-1UG

Tremella Fuciformis Recombinant, DNA

7001

1 ug

ZeptoMetrix

0801806DNA-1UG

Fusarium solani Z081, DNA

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ZeptoMetrix

0801808DNA-1UG

Scedosporium Prolificans Z083, DNA

4524

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ZeptoMetrix

0801827DNA-1UG

Aspergillus Niger Z105, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801834DNA-1UG

Rhizopus oryzae Z106, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801899DNA-10UG

Plesiomonas shigelloides Z130, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801901DNA-10UG

Vibrio Cholerae Z132 (toxigenic)

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801761DNA-1UG

Mucor Indicus Z079, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801759DNA-1UG

Cunninghamella bertholletiae Z080, DNA

4524

1 ug

ZeptoMetrix

0801700DNA-1UG

Cryptosporidium Parvum-S. cerevisiae Recombinant, DNA

7001

1.0 ml

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0801716DNA-1UG

Aspergillus Fumigatus Z014, DNA

4524

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Serratia Marcescens Z053, DNA

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Blastomyces Dermatitidis Recombinant W303-Bde, Genomic DNA

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Haemophilus ducreyi class I, DNA

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Bacteroides Thetaiotaomicron Z037 DNA

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Citrobacter Koseri Z039, DNA

7001

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ZeptoMetrix

0801747DNA-10UG

Escherichia coli O111:NM, DNA

7001

10 ug

ZeptoMetrix

0801755DNA-1UG

Rhizopus Microsporus Z056, DNA

4524

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0801004

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0801005

Anti-HIV-l p17 Clone 32 - 5.8.42

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0801124

Anti-HIV-l p24 Clone 32 - 5.17.76

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0801125

Anti-HIV-l p24 Clone 38 - 8.7.47

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Anti-HIV-l p24 Clone 39 - 5.1.23

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0801128

Anti-HIV-l RT Clone 39 - 4.12.2

30732

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0801136

Anti-HIV-l p24 Clone 39 - 5.4A

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Anti-HTLV-I p19 Clone TP-7

4388

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0802014

Anti-HIV-l p24 Clone 39 - 6.14

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0801018

Anti-HTLV-I p24 Clone 46 - 3.24.4

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Anti-HIV-l RT Clone 39 - 4.12.2

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Anti-HIV-l p17 Clone 2D11

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Anti-HIV-l p17 Clone 32 - 1.24.89

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Anti-HIV-l p24 Clone 39 - 5.4A

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